产品说明：
该试剂盒可以温和的从大肠杆菌细胞中提取蛋白质，不需要超声波破碎仪等机械辅助。大肠杆菌中可溶性表达蛋白、包涵体蛋白均可以采用该试剂盒进行提取。该试剂盒可同时对多个样品进行蛋白质提取操作，具有操作简单、重复性好、效率高等优点。
注意事项：
- 新鲜的或冻存的大肠杆菌菌体均可以采用该试剂盒进行提取蛋白质，对于冻存细胞，提取的效率更高。需根据菌体量来确定最佳的试剂使用量。
- 如果表达的目的蛋白不可溶、错误折叠或形成包涵体，可以采用带有不同融合标签的pNET系列定向表达载体进行表达筛选，确定最佳融合标签。
- 本试剂盒适用于BL21等多种大肠杆菌宿主细胞。如果提取效率较低，可以通过减少大肠杆菌菌液的体积或等倍数增加所使用溶液的体积来解决。
操作步骤：
一、小体积菌体裂解
- 将1 ml大肠杆菌菌液加入到离心管中，7000 rpm离心2 min，弃上清，收集菌体。
- 对应1 ml菌液的菌体，加入180 µL无菌去离子水，通过移液器吹打悬浮菌体细胞。
- 加入20 µL 10×Lysis Buffer，混匀。
- 再加入2 µL Lysozyme，混匀。-20°C冷冻处理，完全冷冻后再进行下一步操作。（一般冷冻2 h就可以。如果大体积的样品处理，可采用过夜冻存确保冻存效果。）
- 在37°C水浴锅中孵育，每隔5 min，震荡混合均匀，直至完全融化。
- 加入2 µL CA Buffer，混匀；再加入2 µL DNase I，混匀。
- 在37°C水浴锅中孵育30 min，每隔5 min，震荡混合均匀，直至样品粘稠现象消失。
- 加入23 µL NA Buffer，混匀。
- 12000 rpm离心2 min，收集上清。
- 10. 上清可用于酶活测定、SDS-PAGE分析、或用于Ni-Mag磁珠快速纯化和Ni NTA Sepharos
二、大体积菌体裂解
- 将大肠杆菌菌液加入到离心管中，7000 rpm离心5 min，弃上清，收集菌体。
- 对应1 g菌体，加入9 mL无菌去离子水，通过移液器悬浮菌体细胞。
- 加入1 mL 10×Lysis Buffer，混匀。
- 再加入100 µL Lysozyme，混匀。-20°C冷冻处理，完全冷冻后再进行下一步操作。（如果大体积的样品处理，可采用过夜冻存确保冻存效果。）
- 在37°C水浴锅中孵育，每隔5 min，震荡混合均匀，直至完全融化。
- 加入100 µL CA Buffer，混匀；再加入100 µL DNase I，混匀。
- 在37°C水浴锅中孵育30 min，每隔5 min，震荡混合均匀，直至样品粘稠现象消失。
- 加入1.12 mL NA Buffer，混匀。
- 12000 rpm离心2 min，收集上清，用于Ni-Mag磁珠快速纯化或Ni NTA Sepharose纯化。
