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pTS Fh8 TOPO表达载体

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pTS Fh8 TOPO是在pET28a基础上构建,具有Kanamycin抗性。N端的Fh8融合标签有利于提高不同异源蛋白的翻译效率和促进可溶性表达,在一定程度上可以解决形成包涵体、表达量低、被蛋白酶降解等难题。C端Strep‑tag II标签通常不影响目的蛋白的结构与功能,可用于高特异性亲和纯化,进一步提高最终产物的纯度与均一性。

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pTS Fh8 TOPO表达载体,具有Kanamycin抗性,是在pET28a骨架基础上改造优化而成。载体N端融合Fh8(Fasciola hepatica 8 kDa antigen,肝片吸虫8 kDa抗原)融合标签与6×His序列,同时经TOPO拓扑异构酶修饰,可实现高效定向克隆与快速载体构建。其中Fh8是来源于肝片吸虫的小分子可溶性蛋白标签,分子量仅约8 kDa,属于小分子促溶标签,其氨基酸序列富含亲水性残基,天然水溶性极强,且空间结构紧凑稳定,在完全保留自身折叠完整性的前提下,能高效促进融合蛋白正确折叠,显著提升难溶蛋白、疏水蛋白及真核外源蛋白的可溶性表达比例;Fh8标签在大肠杆菌中具有超高表达特性,表达时可占细胞总蛋白的38%以上,且表达产物不易形成包涵体,能稳定维持可溶性状态。

大量研究证实,Fh8融合标签不仅能显著提升真核外源蛋白的翻译起始效率与整体表达量,还能有效抑制蛋白错误聚集与包涵体形成,减少蛋白降解,大幅提升重组蛋白的可溶性占比与表达稳定性,尤其适合低表达、难折叠外源蛋白的表达优化。本载体N端6×His与Ni²⁺的特异性结合实现融合蛋白的快速富集;标签区域可通过TEV蛋白酶精准酶切切除,酶切位点设计合理,能无痕释放天然目的蛋白,避免标签对目的蛋白结构、活性及后续实验的干扰;载体自带C端Strep tag II标签,特异性强、非特异结合低,且标签短小温和,通常不会干扰目的蛋白天然空间结构与生物活性,可用于二次高特异性亲和精制,有效去除杂蛋白、酶切残留标签及蛋白降解片段,进一步提升最终蛋白产物的纯度、均一性与应用稳定性。

次数

10次, 20次, 50次

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