谷胱甘肽琼脂糖凝胶4FF

产品说明：

谷胱甘肽琼脂糖凝胶4FF用于一步法快速纯化谷胱甘肽转移酶（Glutathione S-Transferase，GST），带有GST-tag的重组蛋白等。通过该层析介质可以直接从裂解液中将GST-tag融合蛋白纯化出来，未与介质结合的其他蛋白质被漂洗除去，GST-Tag重组蛋白可以通过含有10 mM谷胱甘肽的洗脱液回收获得，条件非常温和，有利于保存目的蛋白的生物活性。

谷胱甘肽琼脂糖凝胶4FF具有吸附容量大、稳定性高、选择性好等优点，可以在非变性条件下对含有GST标签的重组蛋白进行纯化。具体特性见下表：

谷胱甘肽琼脂糖凝胶4FF的特征参数

特征参数	指标
基质	4%高度交联琼脂糖凝胶
配基	谷胱甘肽
平均粒径	90 µm (45-165 µm)
动态承载量	10 mg/mL resin
最大线性流速	600 cm/h (20 ml/min) （使用XK16/20纯化柱5 cm高）
建议流速	＜150 cm/h
最大耐受压力	0.3 MPa，3 bar
储存溶剂	20%乙醇
pH稳定性	3-12

 组成：

Component	PPM201-01	PPM201-02
谷胱甘肽琼脂糖凝胶4FF	10 mL	25 mL

 注意事项：

1. 在使用和保存过程中，避免对介质进行冷冻、干燥等操作。
2. 为避免柱子堵塞，蛋白样品上样前，建议使用0.45 µm过滤器进行过滤。

操作步骤：

自备试剂：

Binding Buffer（1×PBS）:

140 mM NaCl，2.7 mM KCl，10 mM Na₂HPO₄，1.8 mM KH₂PO₄，pH 7.3。

Elution Buffer:

10 mM 还原型谷胱甘肽，50 mM Tris-HCl，pH 8.0。

 

谷胱甘肽琼脂糖凝胶4FF亲和柱的制备

1. 上下翻转混匀谷胱甘肽琼脂糖凝胶4FF介质，然后取一定体积装入到层析柱中，介质自然沉降，并流干储存液。（介质自然沉降后为1个柱体积。）
2. 加入5倍柱体积的去离子水冲洗树脂。
3. 加入5倍柱体积的Binding Buffer（1×PBS）平衡树脂，放置待用。

裂解液的制备

4. 本树脂适合从细菌、酵母、昆虫、哺乳动物细胞等裂解液中纯化GST-Tag融合蛋白，用户可根据实际情况，自行调整设计实验，确定最佳的裂解方案，使裂解液的组成与Binding Buffer的组成相近。
5. 裂解液在4°C，1,2000 rpm 离心10 min以沉淀细胞碎片，收集上清备用。

GST-Tag融合蛋白的结合

6. 将含GST-Tag重组蛋白的澄清样品上样至纯化柱中，流出流速控制在＜150 cm/h（上样过程中较低的流速可以增加目的蛋白的结合效率），收集流出液待后续分析。

漂洗

7. 加入10个柱体积的Binding Buffer进行洗柱，或者直到流出液的A₂₈₀值达到最低且稳定。

洗脱

8. 加入5个柱体积的Elution Buffer进行洗脱（较低的流速可以增加目的蛋白的洗脱效率），收集洗脱液。或者根据流出液A₂₈₀数值进行判断，当数值急剧上升时开始收集洗脱液，直到A₂₈₀数值降至最低且稳定时停止收集。
9. 根据目的蛋白的性质和用途，可以采用葡聚糖G-25凝胶或透析袋将储存液更换到相应的溶液中备用。