产品说明:
pNPIC9 TOPO表达载体是在pPIC9表达载体的基础上,通过TOPO拓扑异构酶作用构建的,用于外源基因在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的高效表达,载体上特有的α-factor信号肽序列可以将合成的蛋白分泌到细胞外。同在,在C端加有myc表位标签和多聚组氨酸标签,有利于蛋白的检测和纯化。
pNPIC9 TOPO表达载体可将正向引物加有CACC的平末端PCR产物定向连接到表达载体上,通过诱导调控PAOX1启动子,可以使异源基因在毕赤酵母(Pichia pastoris)中得到高效表达。整个连接反应仅需要5 min,阳性克隆效率达到90%以上,不需要任何载体处理、连接酶、PCR产物修饰和特定的引物序列,具有高效、快速、高阳性率等优点。
特点:
高效:阳性克隆效率大于95%;
快速:室温5 min完成连接反应;
简单:引物设计很简单无需过多经验,连接、转化只需要3个步骤。
节约时间:不需要自己操作制备载体,包括质粒的提取、质粒的酶切、胶回收等,可节约时间20多个小时。
节约成本:不再需要质粒提取、内切酶、连接酶,以及基于同源重组克隆中更长的引物。更加灵活:不受载体和目的片段中酶切位点的限制。
C端myc表位标签:(Glu-Gln-Lys-Leu-Ile-Ser-Glu-Glu-Asp-Leu-Asn),可通过抗myc抗体或抗myc-HRP抗体检测融合蛋白。
C端多聚组氨酸标签:可通过Ni柱亲和层析金属螯合树脂上纯化重组融合蛋白。